Arxiduquessa d’Àustria, fou filla de l’emperador Maximilià II i de Maria d’Àustria, germana de Felip II de Castella, que volgué fer-la (1583) la seva cinquena muller, però ella el rebutjà i es feu religiosa. El 1585 professà al convent de Las Descalzas Reales de Madrid, amb el nom de sor Margarida de la Creu. Tingué influència sobre Felip III i Felip IV de Castella. Fou retratada per Rubens, i fra Juan de La Palma n’escriví la biografia (1636).