Inicià la seva formació el 1505 com a cantant a l’església de l’Annunziata de Florència, on rebé, a més, instrucció particular per part del compositor Bartolomeo degli Organi. Fou amic d’Andrea del Sarto, que pintà els retrats de tots dos, juntament amb el de l’arquitecte Il Sansovino, als frescos de l'Adoració dels Mags de l’església de l’Annunziata. Entre els seus amics florentins hi havia nombrosos escriptors involucrats en la revolta republicana contra els Mèdici del 1521, i que Layolle acollí a Lió com a refugiats, ciutat en la qual el compositor s’havia establert aquell mateix any, després d’haver abandonat Florència el 1518. A Lió exercí com a organista de l’església de Notre-Dame de Confort. A més, des del 1530 treballà component i publicant música en col·laboració amb Jacques Moderne. També a Lió entrà en contacte amb la vida cultural de la ciutat. La major part de les seves composicions sacres es perderen; en canvi, se n’ha conservat un major nombre de composicions profanes, especialment madrigals i chansons.