Filla de Thomas Boleyn i dama d’honor de la primera muller d’Enric VIII, Caterina d’Aragó. El seu matrimoni fou un element d’ordre personal que intervingué en les tensions i la ruptura d’Enric VIII amb l’església de Roma. Enric VIII, cap de l’església anglesa des del 1531, obtingué, dos anys després, de l’arquebisbe de Canterbury Thomas Cranmer, l’anul·lació del seu primer matrimoni i feu públic el seu casament amb Anna. La Santa Seu declarà vàlid el primer matrimoni i excomunicà el rei anglès (1534). Anna Bolena, mare de la futura reina d’Anglaterra Elisabet I, acusada d’adulteri, fou condemnada a mort el 1536.